The Use of 2, 3, 5-Triphenyltetrazolium Chloride in Assessing Leaf Protoplast Metabolic Activity   :   TTC還元力による葉肉プロトプラスト代謝活性の評価 

作成者 Watanabe, Masami, Watanabe, Yukio, Shimada, Noritsugu
作成者 (ヨミ) ワタナベ, マサミ, シマダ, ノリツグ
作成者の別表記 渡辺, 正巳, 渡邉, 幸雄, 嶋田, 典司
日本十進分類法 (NDC) 620
内容 葉肉プロトプラストのトリフェニルテトラゾリウムクロライド(TTC)還元力を測定することによって, プロトプラストの代謝活性を評価する方法を確立した.葉肉プロトプラストを0.05%リン酸緩衝液(pH7.4)に懸濁し, 16時間30℃, 暗黒下で培養した.不溶性のフォルマザンは80%のエタノールでプロトプラストから抽出し, 520nmの吸光度を測定した.ショ糖浮遊法で精製したナタネ葉肉プロトプラストはTTCを還元したが, 細胞の破片からなる画分はTTC還元力を示さなかった.ペチュニアの葉肉プロトプラストをN-メチル-N-ニトロ-N-ニトロソグアニジン(MNNG)で処理し, TTC還元力とコロニー形成率の関係を調べた.その結果, TTC還元力はMNNG濃度の増加とともに減少したが, コロニー形成率はMNNG濃度が25μg/mlに達すると急激に減少した.コロニー形成率はプロトプラストの活性を反映しているので, TTC還元力からプロトプラストの代謝活性を推定できるものと思われる.
The method of evaluating leaf protoplast metabolic activity by use of triphenyl tetrazolium chloride (TTC) has been established. The procedure for the TTC test is as follows: leaf protoplasts were isolated from Brassica napus cv. "Bronowski" and purified by floatation on 0.7M sucrose. The leaf protoplasts were suspended in 0.6M sorbitol-0.05M phosphate buffer (pH 7.4) containing 0.05% TTC and incubated in dark at 30℃ for 16 hours. Reduced water insoluble formazan was extracted from the protoplasts with 80 1.475460e-268thanol. Record the absorbance at 520nm. The purified protoplasts reduced TTC, whereas celluar or subcelluar debris gave negative TTC test. In order to estimate the relationship between TTC reduction rate and plating efficiency, leaf protoplasts of Petunia hybrida were treated with N-methyl-N'-nitro-nitrosoguanidine (MNNG). TTC reduction rate decreased with increasing concentration of MNNG, but the plating efficiency decreased conspicuously as MNNG concentration reached to 25μg/ml. Consequently, it could correlate with the plating efficiency. The TTC reduction test described here offers a simple test for prediction of leaf protoplast metabolic activity.

公開者 千葉大学園芸学部
コンテンツの種類 紀要論文 Departmental Bulletin Paper
DCMI資源タイプ text
ファイル形式 application/pdf
ISSN 0069-3227
NCID AN00142658
掲載誌情報 千葉大学園芸学部学術報告 Vol.46 page.53-58 (19920325)
情報源 The technical bulletin of Faculty of Horticulture, Chiba University
言語 英語
著者版フラグ publisher

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